培养基干粉是有菌的，配置好后，如果不及时灭菌，细菌就会大量繁殖，消耗营养成分，导致培养基失去原有作用，所以必须及时灭菌。
如果怕高压不充分，培养基灭菌不彻底，可一每次多配置一小份同样的培养基，高压后将该培养基放置培养箱中，如果该小份培养基出现大量菌增殖现象，说明灭菌不充分，反之，则是无菌的。
1、无菌试验
抽取少量培养基做无菌试验,按照卫生消毒规范或药典上的方法操作（简单地说取少量灭菌好的物体分别进行有氧、厌氧、真菌培养,7天后培养液不浑浊并且镜检无菌）,灭菌彻底则应该可以通过无菌试验.
2、预培养
将配置好的培养基按其需要培养24-48小时,至少过夜,如果是固体培养基则无任何菌落生长,如果是液体培养基则不浑浊.严格的说配好的培养基都应该做预培养的,而且是全部做,一方面可以把受细菌污染的培养基丢弃以免影响试验,一方面将附着的水气蒸发掉否则可能会干扰试验.
3、灭菌指示剂
分为化学指示剂和生物指示剂.灭菌时将指示剂放入灭菌锅中的不同部位一同灭菌,如果是化学指示剂则其颜色变化符合要求；生物指示剂（嗜热芽胞杆菌）灭菌后进行培养为阴性.
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