①在基因工程中，DNA连接酶只用于DNA拼接重组，①正确；
②减数分裂第一次分裂时，同源染色体分离，而着丝点分裂发生在减数第二次分裂后期，②错误；
③用于质壁分离的洋葱表皮细胞属于成熟的植物细胞，该细胞已经高度分化，不能进行细胞分裂，③错误；
④胰岛细胞的分泌能力较强，因此比心肌细胞具有更多的高尔基体，④正确；
⑤由于酶在高温条件下会变性，即空间结构会改变，并活性不会恢复，因此将温度从100℃降低到37℃，酶的活性不变，⑤错误；
⑥胡萝卜叶肉细胞脱分化形成愈伤组织后全能性增大，⑥正确．
故选：C．
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