非限定性定语从句，一定要逗号隔开吗？

是的，一定要

非限定性定语从句起补充说明作用，缺少也不会影响全句的理解，它与主句往往用逗号隔开。
楼主问必须用逗号隔开？
例句：
These apple trees，which I planted three years ago，have not borne any fruit.这些苹果树是我三年前栽的，还没有结过果实。

如果不用逗号隔开，就是These apple trees which I planted three years ago have not borne any fruit.从语法上来说也能读懂，但是会显得非常冗长，主次不明。所以，一般能断开的还是断开。

没有绝对，具体情况具体分析。

非限定性定语从句能加and but,但是and but不能引导非限定性定语从句。非限定性定语从句定义：非限定性定语从句起补充说明作用，缺少也不会影响全句的理解，它与主句往往用逗号隔开，如若定语从句有限制性和非限制性两种。限制性定语从句是先行词不可缺少的部分，去掉它主句意思往往不明确；非限制性定语从句是先行词的附加说明，去掉了也不会影响主句的意思，它与主句之间通常用逗号分开，将非限定性定语从句放在句子中间，其前后都需要用逗号隔开。非限定性定语从句分类：1，who引导2，whom引导关系代词whom用于指人，在句中作动词宾语和介词宾语，作介词宾语时，介词可位于句首。3，whose引导whose是关系代词who的所有格形式，在从句中作定语。whose通常指人，也可指动物或无生命的事物。4，which引导关系代词which在非限制性定语从句，中所指代和修饰的可以是主句中的名词、形容词、短语、其他从句或整个主句，在从句中作主语、动词宾语、介词宾语或表语。① which指代主句中的名词，被指代的名词包括表示物、婴儿或动物的名词、表示单数意义的集体名词以及表示职业、品格等的名词。② which指代主句中的形容词。③ which指代主句中的某个从句。④ which指代整个主句。5，when引导关系副词when在非限制性定语从句中作时间状语，指代主句中表示时间的词语。6，where引导副词where在非限制性定语从句中作地点状语，指代主句中表示地点的词语。7，as引导as引出非限定性定语从句时，代替整个主句，对其进行说明但通常用于像as we all know, as it is known, as is known to all, as it is, as is said above, as always mentioned above, as is usual, as is often the case, as is reported in the newspaper等句式中。as在非限定性定语从句中作主语、表语或宾语，且引出的从句位置比较灵活，可位于句首或句末，也可置于主句中间。通常均由逗号将其与主句隔开。as有“正如……， 就像……”之意。8，which引导关系代词which有时并不代表主句中某一确定的词，而是概括整个主句的意思。介词的选择取决于它与先行词的搭配或与从句中谓语动词的搭配。