组织分离法有几种方式？怎样操作？

组织分离法，通常是指从子实体中分离获取菌丝的快速、简单易行方法。银耳组织分离有两种方式：一是从耳片中分离菌肉块萌发菌丝；另一种是从白毛团直接分离菌丝。均能获得菌种。下面分别介绍操作方法：

（1）耳片分离法

①挑选种耳。在封闭、无杂菌专门用于分离挑选的银耳子实体中，选取白毛团健壮、丰满，子实体原基块形成早，出耳早，子实体朵形圆整，耳片肥厚，叶片粗花、色泽洁白的作为分离材料。也可以从银耳栽培群体中，选择符合标准种耳条件的子实体，作为分离材料。

②剪耳入瓶。在接种箱中，将子实体剪取1厘米见方（小指甲大）的小耳片，置于无菌水中冲洗或用酒精擦拭耳片表面，再用纱布吸干水分后，接入预先灭菌好的瓶装木屑培养基上，让孢子萌发菌丝。一次接种30瓶以上，以供筛选。

③诱孢萌发。耳片接入后置于23～24℃下培养，并逐日观察，发现杂菌污染的，立即淘汰。待孢子散落在培养基上，萌发成白色芽孢后取出耳片，塞好瓶口棉花。一般从耳片入瓶到芽孢出现需10～15天。当原有种耳部位出现小米粒大的白毛团后用接种针勾取其中洁白、圆满的1粒，移接到木屑种培养基上，在22～24℃下，继续培养30～35天。选其中耳友菌丝长势旺盛，分泌黑色素均匀，白毛团胶质化快，原基健壮、出耳早、朵型圆整的子实体，待其长至拇指或乒乓球大时，即成木屑一级种。

（2）单团分离法

单团分离法速度快，可在短期内生产出大量菌种；但只能一次性使用，如若反复使用容易引起耳友菌丝退化，影响产量。具体操作如下：

①选材。在菌种室内选取性状符合商品性生产的菌种，其菌龄10天左右，作为分离材料。要求培养基表层菌丝生长健壮、白毛团圆满结实；培养基内耳友菌丝生长旺盛，分泌黑色花纹清晰，无杂菌污染，无虫害的原种。

②移接。把选定的原种搬入接种箱内，打开瓶口棉塞，在众多的白毛团中，认真瞄准理想的一个，用接种针勾取单个白毛团，迅速移接到琼脂培养基或木屑培养基表面，每支试管或菌种瓶移接1粒。一次移接40～50支或瓶，便于筛选。

③培养。接种后在22～24℃下，经10～15天培养和观察，待耳友菌丝蔓延斜面，白毛团周围出现淡黄色水珠，继而形成碎米状原基时，即为琼脂一级种。接种在木屑菌种瓶培养基上的白毛团，一般经培养30～35天，子实体出现拇指大时，选优即成木屑一级种。