HPLC测定白芍中芍药苷含量的色谱条件是怎么选择的

1 仪器与试剂
Bio Focus 3000型毛细管电泳仪(美国Bio Rad公司)；融熔石英毛细管柱(未涂渍)501μm×50cm(有效分离K度45．5cm，河北永年光导纤维厂)；微孔滤膜(0．45μm)及过滤装置(Millipore，USA)；超纯水器(Milli-Qplus，USA)芍药苷对照品(中国药品生物制品检定所)；药材(奉院中药房提供)；八珍丸(水蜜丸)和八珍益母丸(水蜜丸)(市售品) 甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果
2．1 测定条件：运行缓冲液：50mmol／L硼砂缓冲液，用氢氧化钠凋pH为10．6；操作电压：20KV，极性由正到负；检测波长：230nm；柱温：20℃；采用压力进样，压力进样常数为10psi×S 运行缓冲液和样品溶液均经0．45μm微孔滤膜过滤后使用毛细管冲洗方法：每次开机用超纯水冲洗3min，后用0．1mo1／L氢氧化钠冲洗3rain，再用超纯水冲洗3min，然后运行缓冲液冲洗3min。每次测定之间用运行缓冲液冲洗lmin
2．2 对照品溶液的制备和测定：精密称取在五氧化二磷减压干燥器中干燥36h的芍药苷10．0mg，用甲醇定容成浓度为1．0mg／ml的对照品储备液。取储备液500μ1，置于lml容量瓶中，加运行缓冲液至刻度，进样，测定。
2．3 供试品溶液的制备和测定：八珍丸和八珍益母丸均照《中国药典》(2000年版)“八珍丸 含量测定”项下供试品溶液制备法制备，用运行缓冲液稀释至适当浓度进样，测定。
阴性对照溶液：按处方比例及生产制备方法，制得无白芍的八珍l丸和八珍益母丸空白样品，按供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液，进样，测定。
2．4 标准曲线的制备：分别取芍药苷储备液62．5、125、250、500、1 000μl，用超纯水定容至lml，依次进样后，以药物浓度(C)对峰面积 迁移时间之比值(X)进行回归，回归方程为：C=-1．2 765×100+2．7579×106X，r=0．9995；线性范围为：0．0625～1．0mg／ml
2．5 精密度试验:取浓度为0．25mg／ml的对照品溶液，日内和日问重复进样5次，测定峰面积与迁移时间之比值，计算精密度，日内RSD为1．61％ ；日问RSD 为3．15％
2．6 加样回收率试验：在已知浓度的八珍丸和八珍益母丸样品溶液中分别加入适当芍药苷对照品溶液进样分析，测定含量，回收率结果见表12．7 样品含量测定：用HPCE法对八珍丸和八珍益母丸样品进行含量测定，并同时照《中国药典》(2000年版)“八珍丸”项下HPLC法测定含量，结果表2。

3 讨论
实验中考察pH8-11范围的缓冲液，结果发现，pH大于9．0时，芍药苷能够分离，且所得峰形较好；当pH小于9．0时，则芍药苷峰形变坏且迁移时间延长 、故最后确定最佳pH为10．6．在此条件下芍药苷得以很好分离且峰形较好，迁移时间适中 笔者对硼砂浓度在25～100mmol／L的范围内进行了考察，结果发现，随着浓度的增加，分离度增加，但同时电流增加亦造成基线不稳，兼顾二者关系，最后确定硼砂缓冲液浓度为50mmol／L。
从本实验的分析结果可以看出，HPCE法对八珍丸和八珍益母丸样品中芍药苷的定量是准确有效的，八珍丸的HPCE法与HPLC法测定结果基本一致。然而，HPCE法较HPLC法具有高效、快速、进样体积小、溶剂消耗少和抗污染能力强等特点 《中国药典》(2000年版)(一部)中将HPLC法作为八珍丸中芍药苷定量的方法，要求理论板数不低于2 000，而本实验中用HPCE法的理论板数可达到100 000以上，分离效率大大高于HPLC法。由方法学考察结果可几尢，本法精密度高、稳定性和重现性好。
本实验结果无疑为八珍丸和八珍益母丸中芍药苷的定量提供了新的途径。也可为同类中成药的质量控制提供参考。

其中芍药苷的含量占总甙的90%以上,一般认为芍药苷是白芍的主要有效成分,因此,TGP的药理作用基本代表了芍药苷的药理作用。白芍是常用的传统中药,具有养血、柔肝、敛阴、...