有时单菌落很多次，你可以从单细胞繁殖，它必须重复分离纯种的方法有很多你第一次面临着非常全面的，可以看看。
微生物实验室分离纯化方法日期:2010-03-01浏览次数：18
混合微生物种群仅包含某一种或一个微生物过程称为微生物的分离和纯化。在分子生物学的研究和应用，不仅
只包含一个特定的方法或微生物的过程称为微生物的分离和纯化，混合微生物种群中分离。在分子生物学的研究和应用，不仅通过混合的天然微生物的分离和纯化技术分离出特定的微生物，但也一定要注意保持微生物纯培养物的“纯洁”，以防止其他微生物的污染。
1，与固体培养基中分离和纯化
单个微生物的合适的固体介质的表面或内部生长，繁殖，在一定程度上，可以形成可见的，是一个一定的形态结构的子细胞生长组称为菌落。即使当表面的固体培养基许多菌落到细菌的草坪成为此。不同的微生物的生长和形成的菌落在一个特定的介质或细菌草坪通常有稳定的特点，可以成为微生物的分类和鉴定的重要依据。大多数细菌，酵母，以及许多真菌和单细胞藻类，形成孤立的固体培养基上的菌落，用一个合适的片剂分离方法是很容易获得的纯培养。所谓的平面，即培养板中提到的，它是指在固体培养基倒入无菌的陪替氏培养皿中，并冷却和固化后，盛固体培养基平板。此方法包括一个单一的分离微生物，并固定在固体培养基的表面或内部的。固体培养基凝固与琼脂凝胶材料中，每一个独立的活微生物的生长，繁殖，形成菌落，菌落形成可移植的。最常见的分离，培养的微生物琼脂固体培养基上是一个坚实的中小板。容易被科克成立100多年来，一直是最常见的手段的不同菌株板分离微生物纯培养。
1.1稀释倒平板法
第一个微生物悬浮液了一系列的稀释（如1:10,1:100,1:1000,1:10000），然后稀释剂一点，并已熔化和琼脂培养基冷却至50℃或约混合，振摇后，倾入消毒的陪替氏培养皿，直到在琼脂凝固后，使细菌的琼脂平板中，并培养一定的时间，可能会出现的菌落。如果稀释适当地在平坦的表面上出现或琼脂培养基中，可以分散的单个菌落，菌落可能传播由细菌细胞中，就形成了。然后挑取单个菌落，或重复以上操作数次，就可以得到一个纯粹的文化。
1.2扩展板的方法可以很容易地导致死亡的一些热敏感的菌株，并利用微生物悬浮液加入热介质，然后倒平板电脑也导致一些稀释倒平板法严格的需氧细菌缺乏氧气由于固定在琼脂中间影响其生长，因此纯种的分离方法是微生物学研究的扩散板方法中使用。其做法是第一熔融培养基倾入无菌的陪替氏培养皿中，以制备无菌的片剂，冷却和固化后，一定量的微生物的悬浮液逐滴加入到在平板表面，然后作为一个无菌玻璃从整个板的表面均匀地分散涂布棒杆菌，拾取单个菌落培养后（图1）。
图1扩展板的方法
1.3平板划线法
最简单的方法分离的微生物平板划线法，即接种环无菌精选小料要分开的连续划线无菌平坦面（图2），微生物细胞的数目将减少与划线的数目增加，并且逐渐分散，如果越过如果合适，该微生物可以11分散后的培训，上述平面板的表面上，得到单菌落。有时单菌落，它必须重复多次，然后才能得到纯种分离的单细胞繁殖。其原理是，微生物的样品多次的固体培养基的表面达到分离的目的，从点到线“稀释”。划线的方法很多，常见的容易出现的单菌落划线的斜杠法曲线法，网格法，辐射，四格的方法。
图2平板划线法
1.4稀释摇管
固体培养基分离严格厌氧菌的特殊性，，如果机体暴露在空气中立即死亡，可以准备通常的方法平板，然后放置在一个封闭的容器中培养，并在容器中的氧气可以是化学，物理或生物的方法来清除。对于那些谁是更敏感的氧厌氧微生物纯培养，分离培养法都不能动摇稀释管，它是另一种形式的稀释倾注法。管加热的第一串联盛无菌琼脂培养基琼脂熔化后，冷却并维持在50℃左右，梯度稀释的材料，可以与这些管分离，管快速摇动均匀，冷凝后，在琼脂表面倾倒灭菌的液体石蜡和固体石蜡，介质和空气的混合物的柱层被分离。培养后，形成的菌落在琼脂上在中间的列。挑取单菌落，移植，需要使用无菌针头盖和用毛细管插入琼脂和它们之间的壁进入无菌无氧气体中除去液体石蜡 - 石蜡，琼脂柱吸出，放置在陪替氏菜用无菌刀琼脂柱切成薄片观察和殖民地移植。
2，用液体培养基中分离和纯化
大多数细菌和真菌分离使用的板方法通常是令人满意的，因为它们是在固体介质中的大多数物种上看起来很不错。然而，迄今为止，不是所有的微生物，可以在固体培养基上生长，例如，一些大的细菌的细胞，许多原生动物和藻类等，这些微生物需要使用液体介质中分离，得到的纯培养。使用液体培养基中分离和纯化的
稀释法。在液体培养基中，接种物的顺序稀释以获得高程度的稀释效应，少于一个微生物是在试管中分配。大多数的管子，如果稀释后没有微生物的生长，并在体外培养中得到的微生物的生长可能然后有一个纯培养。稀释后管的比例将大幅增加微生物的生长，获得纯培养的降水。因此，稀释法，固液分离，必须在许多平行试管稀释，大部分（一般应不超过95％）表明没有增长。
3，
分离的单细胞（孢子）只能从该总数的类型的混合微生物种群的优点是被隔离的稀释方法的一个重要的缺点。在自然界中，许多微生物在混合组是少数。在这种情况下，您可以采取的显微切割法直接分离细胞或单个个体进行培养，获得纯培养物，被称为单细胞（或单孢子）分离方法，从一个混居的。单细胞分离难度和细胞或个人的大小成反比，较大的微生物，如藻类，原生动物更容易，个别的小细菌是困难得多。的
较大的微生物，可以使用毛细管提取单个个体，并在大量的灭菌介质转印洗涤数次除去较小的微生物污染。此操作可以在低倍率的显微镜进行，如在解剖显微镜下。相对小的单个微生物，需要在显微镜下使用显微操作使用毛细管或微观的针，钩，环拾取一个单一的微生物细胞或孢子，得到纯培养。在显微镜下的显微操作在没有单细胞分离，也有一些替代的方法可以使用??，例如，可以通过适当稀释的样品制备后成小液滴，在显微镜下观察到的，并只选择一个单元格含有液体纯培养分离。分离的单细胞操作技术有更高的要求，使用大多限于高度专业化的科研。分离
4，选择培养的培养基或培养条件没有能够满足所有的微生物的生长的需要，所有的培养基中选择在一定程度上性质。如果在某种微生物的生长需要是已知的，可以设计适合于该微生物的生长的特定的环境，从而能够以该微生物选自混合微生物种群进行培养，虽然在混合微生物种群种微生物可能是是少数。等的分离，在被称为选择培养分离，特别是适合于从自然界分离的，找到有用的微生物的微生物的纯培养的技术通过选择培养。自然，在大多数场合中的微生物群落是由各种各样的微生物，分离所需的特定的微生物是非常困难的，尤其是当存在时相比，以非常小的其他微生物的量和一定的微生物种，单用途板在一般的稀释方法几乎是不可能的。这种微生物的分离，必须基于的特性的微生物，包括营养，生理，生长条件，培养菌株。或抑制大多数微生物不能生长，或造成这种微生物的成长环境，有利于社区的数量的增加，因此，在一定的时间来培养板稀释的纯培养??分离细菌。
4.1使用在选择平板
直接分离，根据被分离微生物功能选择不同的培养条件下，也有各种方法可以使用??。要分开，例如，嗜热菌，可以在高温条件下培养;分离某些抗生素的耐药菌株，并用抗生素，可以分离成板，一些微生物，如螺旋体，粘细菌，蓝藻等在的琼脂平板的表面。或的士车厢内，他们可以利用的滑动特性的分离和纯化，因为滑行可以让自己和其他微生物不能单独移动。板的微生物群落，使微生物在跑道上滑行滑行前挑接种反复进行，以获得一个纯粹的文化。
4.2富集培养
富集培养的原则和方法是很简单的，不同利用不同的微生物的生命活动的特点，制定具体的环境条件下，唯一的条件相适应的微生物强劲的增长，它在社会上，可以很容易地分离到所需的特定微生物数量大大增加。富集条件可以根据需要分离的物理，化学，生物，和集成的许多方面，如温度，pH，紫外线，高的压力，光，氧气，营养等许多方面的微生物的特性选择。在相同的培养基和培养条件下，它是容易反复移位的物种的菌株后，在固体培养基上生长，并最终浓缩的单个菌落。如果你想分开一段寄生菌的样品接种到相应敏感宿主细胞群体，有很大的增长。通过反复移动的物种可以得到纯寄生菌。
5，二元文化
分离，得到纯培养的目的。然而，在某些情况下，这是很难做到的。但可用的二进制文化作为替代品的纯化和培养。文化包含两个或更多种微生物混合培养作为一个已知的，并仅含有2种微生物的培养，但也有是同时保持意识文化称为二进制文化之间的特定关系。如二进制文化是最有效的方式来保存病毒，因为病毒是细胞生物的严格细胞内寄生。有些细胞和微生物也有严格的生物细胞内寄生物，或特殊的共生关系。这些微生物，二元文化是最接近的纯培养物的培养方法，在控制的条件下，可以在实验室中实现。此外，原生动物大鳄微小的微生物很容易在实验室培养的方法与双文化，文化的微生物原生动物和狩猎。例如，纤毛虫，变形虫和粘菌。
几种方法如上所述，平板分离方法一般用于实验室微生物的分离和纯化。在固体培养基上的单个菌落的微生物的生长和形成，通常是由一个细胞组件制成的复制品。单菌落被选中，并获得一个纯粹的文化。可以通过稀释涂布平板或板裸奔技术的方法，以获得单个菌落。值得注意的是，通过在平板上生长的单个菌落，分离从微生物种群不一定可以保证的纯培养。因此，纯文化的决心，除了观察菌落特征，但也与显微镜检查，以确定个体的形态特征，一些纯培养的微生物通过一系列的分离和纯化过程，以及各种特性，以获得。
每个菌落的细菌都是由同一个细菌分裂繁殖出来的。它们的遗传物质基本上一样。而不同菌落的细菌则有可能因为在平板培养之前的步骤（如质粒的重组及转化）而导致遗传物质有所差异。如质粒重组时对DNA有所损伤的话，质粒转染后DNA被酶修复时有可能出错。
所以需要使用同一个菌落的细菌来做后续实验，以确保菌株遗传物质的同一性。
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