51问答网 > 3✀RACE PCR 进行扩增2000多的目的片段，电泳的结果是只出现小于100bp的荧光条带，请教分析原因？

3✀RACE PCR 进行扩增2000多的目的片段，电泳的结果是只出现小于100bp的荧光条带，请教分析原因？

2024-12-23 04:55:05

推荐回答（3个）

回答1：

这么小？应该是没扩出来，是引物二聚体。以前我也是这样子，主要是引物的问题。1，看看你的引物有无问题，可先用outer和inner与别的后引扩一下，看能扩出来不；2，能扩出来证明引物没问题，再要看下你的RNA有无降解，可变性跑个电泳看下；3，如果以上都无问题，那看看试剂有没过期，操作对不对；如果还没出来，可加Q再详谈吧，以前就被这个折腾死了！
希望能帮到你，实验顺利！！！

回答2：

最多见的是引物扩增了其他非特异性的产物。
还有就是这个基因有不同的剪切。你测个序就知道了。

回答3：

小于100bp的带基本上是引物二聚体，不用考虑了。
你race用了几种随机引物？
最可能的原因是基因组模板不行，浓度和纯度必须好，优选柱式试剂盒提取；第二是随机引物用量不足，一般要求是特异引物的10倍；第三是退火温度要再降降低。