A、检测生物组织中还原糖、脂肪和蛋白质的三个实验中，只有脂肪的检测可以通过制作装片利用显微镜进行观察，A正确；
B、酵母菌既可以进行有氧呼吸产生二氧化碳，也可以通过无氧呼吸产生二氧化碳，因此不能用是否产生CO2来确定它的呼吸方式，B错误；
C、探究培养液中酵母菌种群数量的变化实验，应先将盖玻片盖在计数室上后，从盖玻片边缘滴加酵母菌培养液，C正确；
D、胡萝卜素在层析液中的溶解度最大，随层析液在滤纸条上的扩散速度最快，因此距离所画滤液细线最远，D正确．
故选：B．
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