PCR时loading buffer的位置就代表DNA 的位置吗?一般loading buffer到什么位置时可以终止电泳?

2024-12-23 15:31:52
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回答1:

不代表
前面的蓝色的条带是溴酚蓝,代表的片段大小是 300bp,后面的有点绿色的条带是二甲苯青,代表的片段大小在4000bp左右。
loading buffer的功能主要有两个。第一,里边的指示剂溴酚蓝和二甲苯酚起到指示的作用,显示电泳的进程,以便我们适时终止电泳;第二,里边的成分甘油可以加大样品密度,使样品密度大于TAE,从而沉降到点样孔中,防止样品飘出点样孔。
只是用于指示作用,防止跑胶跑过了。一般跑电泳时,片段的大小很少小于300bp,大于4000bp,目的DNA片段的电泳迁移率介于两者之间,当前面的蓝色条带迁移到4/5的位置时就可以终止电泳了,蓝色条带在胶内,那么扩增的DNA片段一定还在胶内,其位置在蓝色条带的后面。

回答2:

loading buffer的功能主要有两个。第一,里边的指示剂溴酚蓝和二甲苯酚起到指示的作用,显示电泳的进程,以便我们适时终止电泳;第二,里边的成分甘油可以加大样品密度,使样品密度大于TAE,从而沉降到点样孔中,防止样品飘出点样孔。
这样就是说loading buffer与DNA结合,所以loading buffer所在的位置就是DNA的位置。
电泳结束,一般要看DNA片段的大小。比如说我们实验室用的Maker是1000bp,我们一般都是等蓝色条带跑到第四格时就停止电泳,一般是20分钟左右。

回答3:

不代表,loading buffer中的溴酚蓝条带一般指示了300~400bp长度的条带的位置,二甲苯青代表的是4kb(具体我忘了)的条带。