因为没有扩增出目的片段，引起原因的可能性有好多种，引物设计是否合理、引物浓度是否合适、退火温度是否合适等
有可能就是引物之间产生二聚体了啊，还有可能就是本来就没阳性，你做个菌液PCR是试试看吧
设计的引物质量不高，建议做个阳性对照通用引物扩的区域包括你的插入片段么？看大小是否符合。提的质粒做下酶切反应也能知道是否成功插入。
假阳性
