6kb以上的确有点大,会影响转染效果
1.用脂质体和阳离子转染试剂。现在很多公司都有卖转染试剂的,你可以直接买转染试剂来进行转染。比如说最经典的lip2000,或者吉满生物的效果还行,主要是便宜。
2.可以尝试使用电转,但是对细胞伤害较大,需要专门的仪器。
3.慢病毒和腺病毒包装现在价钱在一万不到一些,主要还是看公司报价,你可以谈价钱。
SignaGen公司的GenJet (Ver.II),LipoD293及PolyJet针对哺乳动物细胞的DNA体外转染试剂,均为您提供两种不同的转染步骤——一般步骤及高级步骤,这两种步骤分别针对不同的哺乳动物细胞。高级步骤主要针对难转的哺乳动物细胞,例如:MDCK,MDA-MB231,Caco-2等细胞。使用一般的转染步骤若是转染效率低于5%,那么使用高级转染步骤则可以将转染效率提升至60%。
如何选择转染步骤则取决于您的细胞特性。对于诸如HEK293,Hela,CHO,3T3,COS,HepG2,LNCaP,PC3,PC12,U2-OS,L929,MCF-7及Huh-7等常用细胞,一般的实验步骤就能得到满意的转染结果。对于诸如MDCK,MDA-MB231,Caco-2,SaoS-2及HUVEC等难转细胞,可以选用高级转染步骤。针对您的细胞,若是您尚不明确选择哪种转染步骤,我们建议您可先尝试一般步骤,如果您使用一般步骤得到的转染效率低于5%,那么您的细胞比较难转,您可尝试高级转染步骤。
需要的话可以联系我:jnqsw@163.com
我转过和你差不多的,电转,还不错,我转的是组织不是培养的细胞,可能情况还不太一样,
细胞的话只用磷酸钙转过,不过用的293细胞。
样品实验方案
1.准备细胞进行转染
2.准备Transfectamine 5000-DNA混合物
3.将Transfectamine 5000-DNA混合物添加到细胞培养物中
4.过夜培养
5.用适当的方法分析转染效率
溶液制备
1.工作溶液配制
1.1将2.5ug DNA与200uL无血清培养基混合。
1.2在步骤1中添加7.5 uL Transfectamine 5000。
1.3充分混合并在室温下孵育20分钟。 注意:Transfectamine 5000和DNA的比例需要针对不同的细胞系进行优化,通常:Transfectamine 5000转染试剂(uL)与DNA(ug)的比例= 3-5 uL至1ug
6孔板与10cm板样品方案
组成 6孔板(每孔) 10厘米板
新鲜培养基 2ml 6ml
质粒 ~2.5ug 7.5-10ug
无血清培养基 200ul 600ul
Transfectamine 5000转染试剂 7.5ul ~22.5ul