液相阻断ELISA的原理和步骤

液相阻断ELISA其实就是将抗体（兔抗血清）包被在ELISA板中，于此同时将待检血清做几个稀释度和已知抗原在反应板中反应；4°过夜，然后将ELISA板中包被的抗体弃掉，洗板；将反应板中一定量的反应液加入ELISA板中，37°1h；然后弃液，洗板，加入一定量的一抗（豚鼠抗血清），与所剩抗原结合，37°1h；然后弃液，洗板，加入一定量的酶标二抗（兔抗豚鼠血清+酶标记物），37°1h；然后弃液，洗板，加入配好的显色液，37°显色10-20分钟左右，加入终止液读数。

ELISA原理
　　ELISA是以免疫学反应为基础，将抗原、牵9体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。由于抗原、抗体的反应在一种固相载体──聚苯乙烯微量滴定板的孔中进行，每加入一种试剂孵育后，可通过洗涤除去多余的游离反应物，从而保证试验结果的特异性与稳定性。在实际应用中，通过不同的设计，具体的方法步骤可有多种。即:用于检测抗体的间接法(图a)、用于检测抗原的双抗体夹心法(图b)以及用于检测小分子抗原或半抗原的抗原竞争法等等。比较常用的是ELISA双抗体夹心法及ELISA间接法。