染色时应注意事项
在进行HE染色时还应注意以下问题:
1.组织切片的脱蜡步骤应彻底,否则无论进行那种染色都会发生困难。脱蜡时间要充分,若溶蜡剂使用过久应及时更换以免效率降低,若室温过低,可将溶蜡剂置于温箱中进行脱蜡。
2.苏木素染液使用一段时间后表面易出现亮晶状飘浮物,这可能是液体表面的过氧化物,必须过滤除去,以防沉渣污染组织切片。苏木素液一般染过三、四百张切片后,着色力会减弱,着色不鲜艳,呈灰蓝色时应及时更换新液。
3.染色的时间长短需依据:染剂对组织的染色作用,室温条件,切片厚薄,固定液的类别,染液的新旧而进行调节。所以在染色时必须使用显微镜观察染色程度以利掌握时间。
4.分化十分重要。分化步骤的准确也是染色成败的关键,若分化失当则必然引起染色不匀或过淡,过深等现象,因此分化后一定要镜检,观察胞核是否清晰,胞浆呈淡白色。否则需再次分化,不然一旦复染后,组织会呈紫蓝色即“蓝盖红”现象。
5.还原液不宜过浓,若碱性太强易使组织脱落故以淡为宜。
6.伊红宜淡染,复染过深胞核会不清晰,影响镜检。
7.若脱水,透明等步骤不够彻底,则组织表面会有一层雾状膜。若有这一现象,应立即更换纯酒精脱水,再次透明。在潮湿的季节里应注意酒精的浓度、若降低要及时更换。
8.染色后的组织切片、要将组织四周的污染物痕迹擦掉,以免影响美观。
9.封固剂要适量,滴加时应小心倾滴,盖玻片要轻轻放置,以免气泡产生影响镜检。盖玻片大小选择要合适,一般要大于组织块,以防封盖不全,盖玻片要放正,标签贴牢,编号清楚。从而保证切片的封藏和美观。
10.染好的切片应妥为保存,更应避免日光照射,否则切片容易褪色。
组织切片的脱蜡步骤应彻底,否则无论进行那种染色都会发生困难。脱蜡时间要充分,若溶蜡剂使用过久应及时更换以免效率降低,若室温过低,可将溶蜡剂置于温箱中进行脱蜡。