DNA割胶回收后电泳检测有一条带，然后将回收的DNA做模板再次PCR，引物和前面一样，却只有一片模糊没有带

是怎么回事呢？前面已经P出来过，引物应该没有问题

2025-01-05 05:58:51

推荐回答（4个）

回答1：

这是模板浓度过高，造成引物相对稀释引起的。将回收产物梯度稀释，再扩增即可。

回答2：

1 回收的模板是要稀释后再p的，一般是100~1000倍，具体看你带的亮度决定。
2 循环数太多，二次PCR会降低反应的特异性，可能会出现碱基突变，非特异扩增等，建议降一下循环数。我以前做的会有拖尾现象，如果是长片段的话，不建议做二次PCR。

回答3：

哦,试题高 Tm，看看。
我之前也碰到过，降低模板量
同时提高 Tm, 特异性增加，就会P出来了
当然，也有可能，你会收到的那条带，不是你的两个引物的产物，而是其他，不如单引物的，模板断裂。。等等几率比较小。

回答4：

胶回收以后检测了吗？是不是回收丢了呢？还有回收后要稀释才能用，要不模板浓度太高了。建议稀释50倍。P一下试试，然后再调。