解析:在基因表达载体的构建过程中用同种限制酶来切割目的基因和质粒,使之产生相同的黏性末端,以利于DNA片段的连接。将切割后的目的基因和质粒,用DNA连接酶进行连接,它们之间随机连接,可有三种产物:目的基因—载体连接物、载体—载体连接物和目的基因—目的基因连接物。从图中可以看出,目的基因的插入位点在抗四环素基因上,可推知:目的基因—载体连接物的抗四环素基因被破坏,丧失了抗四环素的能力,但保留了抗青霉素的能力;载体—载体连接物既保留了抗四环素的能力也保留了抗青霉素的能力;目的基因—目的基因连接物既无抗青霉素基因也无抗四环素基因,不具备抗性。获得DNA连接产物以后,必须通过筛选方能获得所需的基因表达载体。导入宿主细胞后方能表达获得基因产物。目的基因表达过程中,RNA聚合酶首先与启动子结合,指导目的基因转录产生mRNA,mRNA再指导蛋白质的合成。从图中可看出抗四环素基因上有两个不同的切割位点,所以在实际操作过程中,为避免切割后的末端任意连接,可用EcoRⅠ和BamHⅠ同时对目的基因和质粒进行切割,使同一切割产物的黏性末端不同。
答案:(1)目的基因—载体连接物 载体—载体连接物 目的基因—目的基因连接物 分离纯化 (2)载体—载体连接物 目的基因—载体连接物、载体—载体连接物 (3)启动子 mRNA (4)EcoRⅠ和BamHⅠ
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