求助分子生物学问题

1RNA为单链，其结构不稳定，较易变性，故提取时应注意。
2（1)提取真核生物DNA用鸟枪法获得其目标DNA，
（2）用相同的DNA内切酶处理大肠杆菌质粒。
（3）将目的DNA与大肠杆菌质粒在DNA连接酶种处理，使得两者结合。
4真核生物其mRNA形成需要加工，真核生物先形成hnRNA，经过加工后形成mRNA，儿原核生物则没有加工过程。
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你可以用DNAMAN这个软件帮助设计，将你所要的碱基顺序输入，在用其PCR引物设计，就可以了。

1.周围环境中的RNase相当多，而且很难降解，就算高温高压灭菌也不一定能清除干净，因此分离纯化RNA时使用的枪头，离心管都必须是RNase free的，如果没有，就要自己用DEPC处理以后再使用，最好使用的枪也是单独一套不要跟提取DNA的枪混用以防止RNase污染，切记不能裸手触摸枪头、离心管等物品。
2.看你要克隆什么区域了，如果是ORF区，最好从cDNA文库里扩增，片段如果比较大，一定要选用品质好一点的高保真酶，扩增循环数不用太多，以防止出现突变。如果是其他区域要抽提genomic DNA，但是扩增以后要用切胶回收，以防止genomic DNA污染。
3.如果出现非特异条带可以提高退火温度试一试，一般出现这个情况有可能是设计引物的问题，模板不好也有可能
4.原核表达一般用于比较简单的不需要复杂加工的蛋白，因为原核表达系统里没有这些加工元件，而真核表达系统多用于表达有复杂结构或比较大的蛋白
5.你这个问题太不专业了，你要扩增多大的序列用于表达，用什么载体？什么酶切位点？这些都是设计引物所必须考虑的

3.出现非特异条带的原因有:1.引物错误(序列较短 引物内部或引物间有互补序列)2.复性温度太低
解决方法:1.重新设计引物2.摸索最佳复性条件