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做荧光PCR的标曲为什么要用质粒做的标准品呢？用梯度稀释的菌悬液直接提DNA测不行吗？

2025-03-15 06:21:45

推荐回答（2个）

回答1：

因为细菌DNA比质粒要大，而且提取过程中容易产生片段，这样的DNA远没有提纯过的质粒好，拿这样的DNA去做标准曲线的话，扩增出来的产物不一定唯一，而且扩增片段浓度也不一定是和模板浓度成线性关系，这样的标准曲线是不能用的。

回答2：

用梯度稀释的菌悬浮液也可以，前提是你在菌悬浮液梯度稀释效果很好。但是由于菌是悬浮在溶液中的，由于重力的作用会造成细菌的不均匀分布，或者多个菌结成团。而质粒可以很轻松的达到理想的梯度稀释，所以在做PCR的过程中，标准曲线的线性梯度曲线会很漂亮。

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