一、性质不同
1、浓缩胶:在不连续聚丙烯 酰胺凝胶电泳中,同一介质的凝胶浓度分为 两种,负极的加样侧一般浓度为2%〜5%。
2、分离胶:不连续缓冲体系聚丙烯酰胺凝胶电泳中的一部分,其组成、缓冲液pH和凝胶孔径与浓缩凝胶不同。它具有分子筛效应的小孔径凝胶。
二、过程不同
1、浓缩胶过程:由于浓缩胶浓度低、孔径大,分离胶浓度高,孔径小。带电蛋白质或核酸离子在大孔径凝胶中运动时,阻力小,运动速度快。当接近小孔径凝胶时,阻力较大,移动速度减慢,使样品浓缩,形成窄带,减少电泳过程中的带扩散。
2、分离胶过程:蛋白质或核酸在电泳过程中由浓缩胶进入分离胶,由于分子筛的作用,小分子物质容易通过,阻力小,迁移速度快。大分子由于较大的电阻而滞后。因此,即使具有类似净电荷和相等的游泳率的物质,也会根据分子量的不同而通过分子筛效应从凝胶中分离出来。
扩展资料:
浓缩胶的作用有堆积作用,凝胶浓度较小,孔径大。将较细的样品加入到浓缩胶中,通过大孔凝胶的迁移浓缩到窄的区域。当样品液和浓缩胶选pH6.8的TRIS/HCL缓冲液,电极液选TRIS/甘氨酸。电泳开始后,HCL解离成氯离子,甘氨酸解离少量甘氨酸自由基离子。
蛋白质带负电,所以它们一起移动到正极。氯离子是最快的,甘氨酸是最慢的,蛋白质在中间。电泳开始时,氯离子游动速率最高,超过蛋白质,在电泳的背面形成一个低电导区,电场强度与低电导区成反比,从而产生较高的电场强度。
使蛋白质和甘氨酸离子快速运动,形成稳定的界面,使蛋白聚集在移动界面附近,浓缩成一中间层。大大提高了电泳的灵敏度。
参考资料来源:百度百科-浓缩胶
参考资料来源:百度百科-分离胶
1、性质不同
浓缩胶:在不连续聚丙烯 酰胺凝胶电泳中,同一介质的凝胶浓度分为 两种,负极的加样侧一般浓度为2%〜5%。
分离胶:不连续缓冲体系聚丙烯酰胺凝胶电泳中的一部分,其组成、缓冲液pH和凝胶孔径与浓缩凝胶不同。它具有分子筛效应的小孔径凝胶。
2、过程不同
浓缩胶过程:由于浓缩胶浓度低、孔径大,分离胶浓度高,孔径小。带电蛋白质或核酸离子在大孔径凝胶中运动时,阻力小,运动速度快。当接近小孔径凝胶时,阻力较大,移动速度减慢,使样品浓缩,形成窄带,减少电泳过程中的带扩散。
分离胶过程:蛋白质或核酸在电泳过程中由浓缩胶进入分离胶,由于分子筛的作用,小分子物质容易通过,阻力小,迁移速度快。大分子由于较大的电阻而滞后,因此,即使具有类似净电荷和相等的游泳率的物质,也会根据分子量的不同而通过分子筛效应从凝胶中分离出来。
扩展资料;
分离胶使用注意事项;
(一)在室温15~30℃,相对湿度60%以下,刷胶后的纸边自然吸收反应时间缩短,一股15~30分钟左右分离好。若室温低于15℃(如冬季12月至3月份),湿度大于60%(夏季),刷胶后的纸边自然吸收反应时间延长,一般30~50分钟,才能达到最佳分离效果。
(二)若室内温度低于15℃或相对湿度大于60%刷胶后的纸边自然吸收反应肘间长,影响后序加工时,可采取先将刷胶后的纸样静置30分钟。
用热风吹拂(注意不要离刷胶部位太近直吹,防止吹裂)加速纸边的快速吸收反应,也能达到自动分离效果。(不能刷胶后立即用热风吹拂,分离胶与纸的涂层需要一定时间的接触反应。)
(三)在使用分离胶时,务必在印刷品切边后立即刷胶,4~8小时后刷胶,分离效果会明显变差,隔日效果更差
(四)因涂胶量不合适或刷胶不均匀(操作生疏)造成的分离效果不好时,必须重新切去刷胶纸边1至2毫米后,再重新刷分离胶。
(五)使用分离胶时,务必保证刷胶纸边吸胶均匀,满足所需的干燥时间(若纸边潮湿就检查分离效果会导致脱页或裂口)。
(六)分离胶室内保存一般不低于半年。
PH值不同,前者主要表现为浓缩效用,后者表现为电荷效用和分子筛效用.
浓缩效应主要在浓缩胶中完成,浓缩胶的pH6.8,在这个pH条件下,缓冲液中的HCl的Cl离子几乎全部解离,Gly的等电点为6.0,仅少数解离为负离子,在电场中移动速度很慢.酸性蛋白质在此pH下解离为负离子,三类离子的迁移速率为Cl一般蛋白质Gly,电泳开始后,Cl离子泳动快,在其后留下一个低离子浓度区.Gly在电场中移动很慢,造成移动离子的缺乏,于是快慢离子间就形成了一个缺少离子的高压区,在高压区内所有的负离子都会加速移动,当移到Cl离子区域时,高电压消失,蛋白质的移动速度慢下来,当以上稳定状态建立后,蛋白质样品在快慢离子间被浓缩形成一个狭小的之间层,并按蛋白质所带负电荷量的多少依次排列成带,浓缩样品,从浓缩胶进入分离胶后,胶的pH升高,Gly的离解度增大,泳动率上升,又因为它分子小,故超过所有的蛋白质分子,紧跟在Cl离子后,Cl离子迁移后,低离子浓度不再存在,形成了恒定的电场强度,因此,蛋白质样品在分离胶中的分离主要取决于它的电荷性质,分子大小和形状,分离胶的孔径有一定大小,对不同相对质量的蛋白质来说,通过时收到的滞阻作用不同,即使静电荷相等的颗粒,也会由于这种分子筛的效应,把不同大小的蛋白质相互分开.