为什么用RNA为模板,以基因组设计引物可以PCR出产物

我来回答一下吧：
1.T/A cloning
这种克隆方式利用的是，一般PCR所用的DNA聚合酶具有在PCR产物3‘端添加一个碱基A的特性，也就是说，实际上常规PCR的产物并不是平末端的，而是有一个突出的A碱基，为了对PCR产物进行高效的克隆，人们开发出了一种专门用于PCR产物克隆的载体--T载体，T载体是一个线性化的载体，其末端是一个突出的T，正好与PCR产物上突出的A配对，所谓的T/A克隆就是将带有突出A尾巴的PCR产物与T载体连接，然后转化宿主菌的克隆，这种克隆效率非常高，很容易成功，应用也非常广泛，常用于下游克隆操作前的PCR产物测序鉴定和方便对PCR产物进行酶切处理。

2.Restriction stick end cloning
翻译过来就是限制性粘末端克隆，就是在PCR扩增引物的设计过程中，在引物中添加特定的酶切位点，这样经过PCR扩增后，得到的片段两端就带有需要的限制性酶切位点，对PCR产物进行酶切后，就可以直接与目的载体进行连接，实现克隆。这种方式省略了T/A克隆，一步到位，但是由于酶切位点位于片段末端，常常导致酶切效率较低，需要较长时间，必须设计好保护碱基。

3.Blunt-end cloning
所谓的平末端克隆，就是用Klenow片段将PCR产物末端突出的A碱基补平，然后与带有平末端的载体进行平末端克隆，平末端克隆效率很低，这种方式一般应用的很少，只是当PCR扩增所用的酶是高保真聚合酶如Pfu时，因为这种酶不会再PCR产物末端添加额外的碱基，PCR产物为平末端的，这时可能会用到平末端克隆，其实对这种PCR产物进行一个加尾处理，再进行T/A克隆，可能更加简单一些，呵呵。

如果你没有反转录就能pcr出来，只能说明:1.你的RNA有DNA污染，如果这样，建议加一点DNaseI降解DNA，再加EDTA中止酶的反应；2，有可能是你实验过程中的某种溶液污染，可以换另外一批实验用试剂试一下。

同意楼上的观点。
如果不是用反转录酶做PCR的话，那就是你的RNA里面有污染。
改正！！：反转录酶不耐热的，做不了PCR。

同意楼上的楼上的观点。
如果不是用反转录酶做PCR的话，那就是你的RNA里面有污染。