食品添加剂的使用标准中对乳铁蛋白要求

乳铁蛋白是食品营养强化剂，它不是食品添加剂，所以使用范围和添加量要参照食品营养强化剂使用标准GB14480来执行。

乳铁蛋白在GB14480-2012中的使用范围和添加量如下：

乳铁蛋白
食品添加剂的质量规格要求、生产使用工艺和检验方法，食品中该添加剂的检验方法或相关情况说明
内蒙古伊利实业集团股份有限公司

一、乳铁蛋白质量规格要求
（一）感官指标
项目
标准
检测方法
色泽
淡粉红色粉末。
取5克被测样品置于一洁净的白色搪瓷皿中，在自然光线下用肉眼观察其色泽和外观形态及其滋气味。
滋气味
具本产品特有的味道，无异味
组织状态
均匀、细密粉末，无吸潮、无结块。正常视力下无可见杂质。
（二）理化指标
项目
标准
检测方法
总蛋白质％
≥95.0
GB 5009.5-2010
乳铁蛋白占总蛋白的比例
≥90%
见本节“二、检验方法”
水分％
≤8.00
GB 5009.3-2010
灰分％
≤5.00
GB 5009.4-2010
铁饱和度
5-20%
见本节“二、检验方法”
pH
4.5-6.8
检测2%水溶液在20℃下的pH
颗粒度要求
40目筛分通过率≥85%
标准筛检测
50目筛分通过率≥50%
溶解度
完全溶解，无肉眼溶物
取0.2克乳粉，置于50℃、200 mL水中，充分搅拌2分钟以上，静止后观察。
（三）微生物、污染物及真菌毒素指标
项目
标准
检测方法
菌落总数（cfu/g）
≤1000
GB 4789.2-2010
大肠菌群（cfu/g）
≤10
GB 4789.3-2010平板计数法
金黄色葡萄球菌（cfu/g）
≤10
GB 4789.10-2010平板计数法
酵母和霉菌（cfu/g）
≤50
GB 4789.15-2010
阪崎肠杆菌（cfu/g）
0/100g
GB 4789.40-2010
沙门氏菌（cfu/g）
0/25g
GB 4789.4-2010
铅（mg/kg）
≤0.15
GB 5009.12-2010
砷（mg/kg）
≤0.2
GB/T 5009.11-2003
黄曲霉毒素M1（µg/kg）
≤0.5
GB 5009.24-2010
二、检验方法
（一）用反相高效液相层析法测定乳铁蛋白的纯度
1. 样品准备
对粉状乳铁蛋白，称出20 mg乳铁蛋白样品，用MilliQ水配成20 mL，1 mg/mL的乳铁蛋白溶液，再通过0.2 μm的乙酸纤维素膜进行过滤。
2. 材料和试剂
（1）MilliQ水（超纯水18 megohm resistivity）
（2）95%的乙腈(氰化甲烷)（HPLC 级）
（3）1%的三氟乙酸（TFA）
2.1 缓冲液准备
（1）缓冲液A：100% MilliQ水
把1 L MilliQ水装在1 L 的SCHOTT瓶中。
（2）缓冲液B：95%的乙腈
分别量取50 mL MilliQ水和950ml乙腈。把二者混合，通过0.45 μm的滤膜进行过滤。储存在1 L的SCHOTT瓶中。
（3）缓冲液C：1%的三氟乙酸
用移液管量取25 mL三氟乙酸放入200 mL MilliQ水中，用MilliQ水补至250 mL。转移到250 mL的SCHOTT瓶中储存。
3. 仪器设备
（1）水基线体系控制和获得数据的设备（Empower）
（2）水2695分离组件和2487双λ吸收检测器
（3）反相高效液相层析柱---Alltech prosphere C4 300A 150mm × 4.6mm, with Alltech All-guard Guard 7.5 × 4.6mm.
4. 高效液相层析的测量方法
4.1 注射体积
50 μL已过滤的乳铁蛋白样品或空白液注入柱中供分析。
4.2 梯度表
时间
（min）
流速
（mL/min）
成分
曲线
% A
% B
% C
0.00
1.0
73.3
16.7
10
10.00
1.0
35
55
10
6
11.00
1.0
18
72
10
6
13.00
1.0
18
72
10
6
15.00
1.0
73.3
16.7
10
6
4.3 温度
柱子温度=35°C
样品温度=10°C
4.4 检测
在波长280 nm处检测乳铁蛋白，乳铁蛋白的洗脱时间大约9.7分钟。