微生物染色的革兰氏染色要点

1、 待检菌菌龄应为18-24小时。一般情况下，革兰氏阴性菌的染色反应较为稳定，不易受菌龄的长短影响；而革兰氏阳性菌，有的在幼龄时呈阳性，超过24小时可变为阴性。故培养物越陈旧，菌细胞衰老、死亡，则染色常为阴性，造成错判。
2、 涂片以匀薄为佳，切不可浓厚。过于密集的菌体，因洗脱不匀常呈假阳性。镜检革兰氏染色反应时，要以分散开的细菌着色为准。涂片后不宜用火焰烤干，宜自然干燥；若经火焰固定时，应以不烫手为度，以免菌体受损，致使染色反应不准。
3、 革兰染色操作的关键步骤是对脱色的掌握，脱色时间不足，革兰氏阴性菌可染成阳性菌；脱色过度，革兰阳性菌会染成阴性菌。故应注意掌握，以无紫色脱出时立即水洗。脱色时间按涂沫厚薄、涂片含水量多少适当掌握，涂沫厚、涂片含水少（水洗后沥干水分）时，脱色时间稍长；涂沫薄、涂片含水量多（未沥干）时，脱色时间稍短，在20-30秒内调整。
4、 碘液配制后，应装在密闭的暗色瓶内储存。如因储存不当，部分碘将被挥发或被还原，试液由原来的红棕色变为淡黄色，以至影响固定甲紫的作用，故不宜再用。
5、 革兰氏染色能否获得满意的结果，与操作者的经验有很大关系。操作没有把握或对染液有怀疑时，应以对照菌同时染色。

革兰氏染色与显微镜检查法