HBV DNA的提取
材料与试剂
l)细胞裂解液0.6%/0.olM EDTA pH7.5
2)SM NaCI:29.2gNaCI(AR级)溶于80ml去离子水中定容至100ml，高压灭菌，室温保存。
3)RNase，进口分装，Sigma公司产品。
4)TE缓冲液:10InM Tris一HCL(pHS.0)/0.01M EDTA(pHS.0)
5)平衡酚溶液:10InM Trls一HCL，pH8.0平衡至pH大于7.8。
6)酚/氯仿/异戊醇(25:24:l)
7)氯仿/异戊醇(24:l)
8)10M乙酸钱
9)10%PEG8000
10)蛋白酶K:以无菌去离子水配制成ZOmg/me--Zo℃保存
11)高速冷冻离心机
12)水浴锅
.方法
1)细胞内游离病毒DNA提取:2.2.15细胞接种于培养瓶中，按Hirt介绍的方法提取HBV DNA‘2。以D一Hank’s液洗涤细胞2次，消化液消化，再以D一Hank’s液洗涤2次，离心，加入10倍体积的裂解液，室温裂解20分钟，加入5MNaCL至终浓度lM，4度静置8小时，以17000G4度离心30分钟，留取上清，上清以RNase(终浓度50ug/ml)37度消化2小时，加等体积酚/氯仿/异戊醇抽提，乙醇沉淀，沉淀重悬于50ulTE缓冲液中。一20℃
2)细胞外的游、离病毒DNA的提取:按照Sells等介绍的方法‘“，取培养上清30ml，低速离心，去沉淀后，加入PEG8000终浓度10%(W/V)4度1小时10000G4度离心10分钟，以10mM TriS一HCL PH7.5/10mM EDTA重悬沉淀，以蛋白酶K(终浓度4O0ug/ml)37℃消化2小时，酚/氯仿抽提，醋酸按和乙醇沉淀10mM Tris一HCC重悬沉淀，加入Rnase至终浓度(50mg/me)消化2小时，酚/氯仿抽提，乙醇沉淀，沉淀重悬于5Ou1TE中。
取5u1DNA溶液稀释100倍测定0D260/OD28O以确定DNA的浓度和纯度。DNA的浓度(ug/ul)=OD26oX稀释倍数/20获得的病毒DNA的样品用于转移引迹,酶联显色。
这是我从网上查到的,现在还没做到这里,不知道有帮助没有
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