①在该实验中，选作杂交实验的两个亲本一定要是纯种，①正确； ②为了便于观察，选定的一对相对性状要有明显差异，②正确；③该实验中进行了正交和反交实验，因此不要求母本的表现型一定为显性性状，③错误； ④通过去雄、套袋和人工授粉来完成亲本间的有性杂交，④正确；⑤杂交时，须在开花前除去母本的雄蕊，而不是雌蕊，⑤错误．故选：B．
