A、做预实验的目的是探索实验条件,也可以检验实验设计的科学性和可行性,因此在正式实验前先做一个预实验,可避免实验的盲目性和资源的浪费,A正确;
B、生长素只能从形态学上端运输到形态学下端,并且只有形态学下端能够生根,因此枝条的上下端不能颠倒,B正确;
C、由于芽能够产生生长素,并且生长素能够促进扦插的枝条生根,因此扦插的枝条常带有3~4个芽,C正确;
D、在探究生长素类似物促进插条生根的最适浓度的实验中,需要设置一组只加蒸馏水的对照组,来确定其生理效应是促进作用还是抑制作用,此外不同的生长素浓度也是相互对照实验,D错误.
故选:D.