酶联免疫吸附测定的原理是什么？

2025-03-09 09:31:09

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回答1：

原理是抗原与抗体之间的特异性结合。酶联免疫吸附是在固相载体上包被好能与目的抗原特异性结合的抗体，当检测样本中含有目的抗原时，其会与固相载体上的抗体相结合，并加入和链接化学发光酶，通过冲洗去掉其他非目的抗原，加入显色底物与之反应，此时吸光度越大也就是颜色越深的就说样本中明目的抗原越多，没有颜色反应的就是不含有目的抗原。

酶联免疫吸附测定，是指利用抗体分子能与抗原分子特异性结合的特点，将游离的杂蛋白和结合于固相载体的目的蛋白结合，并利用特殊的标记物对其定性或定量分析的一种检测方法。其原理是:抗原或抗体能物理性地吸附于固相表面，并且保持其免疫活性;抗原或抗体能与酶通过共价键形成酶结合物，同时保持各自的免疫活性或酶活性;酶结合物与相应的抗原或抗体结合后，能通过加入底物的颜色反应来确定免疫反应的发生，颜色反应的深浅与标本中相应抗原或抗体的量成正比。

回答2：

回答3：

酶联免疫吸附测定（ELISA）的原理主要基于抗原与抗体之间的特异性结合以及酶的催化放大作用。具体来说，其原理可以概括为以下几个步骤：

抗原或抗体结合到固相载体：首先，将抗原或抗体结合到某种固相载体（如聚苯乙烯微量滴定板的孔中）表面，并保持其免疫活性。这样，固相载体就成为了抗原或抗体的“捕获器”。
形成抗原抗体复合物：然后，将待检测的样品（含有待测抗体或抗原）与固相载体上的抗原或抗体按一定程序进行反应，形成抗原抗体复合物。这一步是特异性结合的关键，只有与固相载体上抗原或抗体特异性匹配的抗体或抗原才能与之结合。
洗涤去除未结合物质：通过洗涤步骤，去除反应中未与固相载体结合的抗体、抗原以及其他杂质，确保后续步骤的准确性。
加入酶标抗体或抗原：接下来，加入与待测抗体或抗原特异性结合的酶标抗体或抗原。这种酶标抗体或抗原既保留了其免疫活性，又保留了酶的活性。因此，它既能与固相载体上的抗原抗体复合物特异性结合，又能在后续步骤中催化底物产生颜色反应。
酶催化底物产生颜色反应：最后，加入酶反应的底物。在酶的作用下，底物被催化成为有色产物。如果样品中存在待测的抗体或抗原，那么就会形成相应的抗原抗体复合物，并进而结合酶标抗体或抗原。这样，在加入底物后，就会产生颜色反应。颜色反应的深浅与样品中待测抗体或抗原的含量成正比。
定性或定量分析：通过观察颜色反应的深浅，可以进行定性或定量分析。如果颜色反应明显，说明样品中存在待测的抗体或抗原；如果颜色反应微弱或没有颜色反应，则说明样品中待测的抗体或抗原含量较低或不存在。

由于ELISA方法中加入了酶这一催化剂，极大地放大了反应效果，因此具有极高的灵敏度和特异性。这使得ELISA方法成为生物医学领域中一种常用的检测技术，广泛应用于疾病诊断、疫苗研发、药物筛选等多个方面。