转膜电流太大了，有可能是转过了，建议你用丽春红染下膜，看看蛋白条带是否清晰。我一般用恒压75V，这样子电流只有一百多毫安，差不多也就是五十多KD的蛋白；背景高的话可以加大脱脂奶粉的浓度，用7.5%的，另外脱脂奶粉里可以再加入0.5%的二抗来源动物的血清，漂洗要彻底，TBST 10min 4次。不知你用的是哪个公司的抗体，我的一抗一般都是1:2000-1:5000，可能你抗体浓度也高了，但是你的目的条带并不清楚，所以也不敢确定。你可以尝试改一下条件，如果还不好的话，很有可能是你抗体的原因了。祝你好运！
WB就是很奇怪，一次做出来不一定次次都能出来
你用的是什么膜？建议用PVDF膜，背景低，承载量高。
洗涤再充分一点，一抗和二抗都用PBST洗5次，每次5min.
一抗的浓度并不算高，最后的条带不清晰，说明一抗没过量。 二抗这个浓度也还好。
背景高是洗脱的时候 一抗2抗某一个没洗干净
内容全部来源于网络收集，如有侵权，请联系网站删除：QQ：24596024