PCR跑完电泳看看条带的分子量大小是否和预期一致。正常的话测序,不知道你说的测序有问题具体是怎么有问题,是杂峰?多克隆位点?序列不是预期序列?还是其他?是不是每次都是同一个问题?我也遇到过测序结果回来就是一大段都是前后引物不断斜街重复的序列,结果重新测一次就好了,测序公司的问题也是有可能的。