模板可能有降解,建议避免反复冻融,放置时间不能太长。
抽提RNA时有污染,包括基因组DNA污染和蛋白质污染,需重做抽提。
提高退火温度,减少非特异性扩增。
减少循环次数,减少非特异性扩增。
电泳缓冲液时间太长,ph值和盐离子浓度明显改变。
电泳时电压不能太高,8V/cm。
一般来讲,基于promega和TaKaRa的PCR反应体系中,Mg和dNTP的浓度是相匹配的,不需改动
Probably 拖尾 in your gel is the primers or primer complex, I am not so sure. Do you have positive PCR and negative PCR reaction in your test, that will test whether your system is OK. Try again with different annealing temperatures, and possible with increased magnesium concentrations.
Lastly, use new, more specific primers.
Good luck.
提高退火温度试试,再不行换引物
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