为什么SDS-PAGE电泳时样品液再加样前要在沸水中加热?

那为什么做实验的时候也用上没经沸水浴的蛋白质的样液呢?
2024-12-28 11:03:30
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回答1:

使样品充分变性,伸展,与SDS充分结合,成为雪茄状,这样分子量才能用marker计算,因为marker都是充分变性的。

溴酚蓝在胶中的电泳速度较快,相当于一个很小的蛋白分子,标记你的样品在胶中的电泳距离。

蛋白质电泳前,需用样品缓冲液处理,样品缓冲液中除SDS外,还有还原剂β-巯基乙醇,它可将蛋白质分子中的S-S(二硫键)还原。电泳样品制备时加热,就是为了加速这些组分与蛋白质的反应。

扩展资料:

蛋白质离子进入分离胶后,条件有很大变化。由于其pH升高(电泳进行时常超过9.0),使Gly解离成负离子的效应增加;同时因凝胶的浓度升高,蛋白质的泳动受到影响,迁移率急剧下降。此两项变化,使Gly的移动超过蛋白质,上述的高电压梯度不复存在,蛋白质便在一个较均一的pH和电压梯度环境中,按其分子的大小移动。

分离胶的孔径有一定的大小,对不同相对分子质量的蛋白质来说,通过时受到的阻滞程度不同,即使净电荷相等的颗粒,也会由于这种分子筛的效应,把不同大小的蛋白质相互分开。

参考资料来源:百度百科-SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳

回答2:

有以下几个原因
1. 让蛋白样品充分变型,破坏其结构性,使其成团状,便于通过凝胶
2. 使单位质量的蛋白带上等量电荷(也就是SDS)
这样,当蛋白在凝胶中涌动使,其前进速率只与分子量和场强有关,与本身分子量无关

回答3:

使样品充分变性,伸展,与SDS充分结合,成为雪茄状,这样分子量才能用marker计算,因为marker都是充分变性的。