高效液相色谱使用磷酸盐做流动相时应该注意什么

1. 注意冲洗系统

2. 注意冲洗色谱柱；

3. 注意冲洗进样口；

4. 注意清洗泵头

所有的目的都是为了不让无极盐析出。

因为磷酸盐的水溶性还不错，不过在有机物当中的溶解度就不好了。它遇到甲醇、乙腈容易析出。然后就会把液相管路堵住。

1. 比如，你的流动相是0.05mol/L的KH2PO4-乙腈，每天早上开始使用仪器前，还有每天使用完仪器之后要用10%的乙腈水冲洗。如果流动相是甲醇，要用甲醇水。

   如果系统里面是流动相，不可以直接冲甲醇、乙腈等纯有机相，需要用10%的甲醇（乙腈）水缓冲。也是防止盐析出。

2. 色谱柱也是一样的意思。一般来说250mm*4.6mm的色谱柱，1.0ml/min至少冲洗30min，最好40min。然后如果需要封存的话，再用纯甲醇或者纯乙腈封上。

3. 进样口，这个其实不太重要。主要看你的溶剂。如果你使用流动相溶解的。那么不管是手动进样，还是自动进样，每天实验结束之后，打一针纯水。进样量尽量大一点。

4. 泵头。这个如果是老实验员都知道，如果你的流动相里面含有大量的盐，尤其是有机相还是乙腈的时候，单向阀 特 别 容易堵住。如果有在线清洗泵头的装置的话一定记得使用。如果是手动的就没办法了。坏了的话就拿下来超声吧。
   

   
   

用磷酸盐缓冲溶液,并且磷酸盐缓冲液反相液相色谱用缓冲盐.相比于其酸碱或盐类说,磷酸及磷酸盐非低响应使液相色谱基线非平滑,噪音非,论做梯度等度,都非错基线,且磷酸盐调ph非容易,磷酸氢二钾磷酸二氢钾或磷酸氢氧化钾调整ph2-8（主要看色谱柱耐酸碱性,2-8适合c8或c18ph）非便简单.候用磷酸钠盐,钠盐机相溶解度没钾盐.

一个就是在流动相配制的过程中，保证磷酸盐完全溶解，然后减压抽滤。因为一般实验室使用的磷酸盐只是化学纯的，所以一定要过滤。避免污染色谱柱。
另外一个就是在实验前后记得冲洗系统和冲洗色谱柱。无机盐对于色谱柱和系统都有损伤，所以使用之后要清洗干净。又因为无机盐在水溶液中容易溶解，但是在有机相中溶解度非常低。所以中间要用甲醇水（或者乙腈水）过渡。
每天的顺序应该是：先冲40min流速0.8ml/min的10%的甲醇水（或者乙腈水），然后换流动相，平衡后进样分析。试验结束后再冲40min流速0.8ml/min的10%的甲醇水（或者乙腈水），然后冲30min0.8ml/min的甲醇（或者乙腈）。关机。
这个选择甲醇还是乙腈，要看你实验的有机相了。