穴居狼蛛的洞穴在棉田和其它旱作周围的沟渠、畦沟、村落的旧墙、山坡的向阳面、小路旁等地方。洞口椭圆琅,直径在2.00-2.50厘米,不高出地面,洞口附近丛生杂草,洞体垂直或在出口处稍有弯曲,深度可达30-60厘米。在新疆,繁殖期在7-8月间,雄蛛寻找洞穴中的雌蛛进行交配。交配后的雌蛛就在洞穴内产卵。雌蛛有护卵习性。孵出的幼蛛,常群集于雌蛛的背上,甚至攀附于附肢上,一同离开洞穴,随母蛛在外活动。有时在洞内雌蛛的背上可见到体长达8.50毫米的幼蛛。雌蛛先把幼蛛带到水边,然后再带到潮湿的草地,在这里雌蛛一边过游猎生活,一边随时在适应的地点用其后面的步足不时将幼蛛扫下,使其独立生活。
幼蛛经过短暂的游荡生活和偶尔的隐蔽生活后,开始挖洞而营穴居生活。在洞内脱蜕皮、休眠和成长。白天多隐伏于洞内,夜晚出来寻找猎物。当捕获猎物后,一般是把虫子拖入洞内进食。
穴居狼蛛,是一种剧毒的蜘蛛。并含有抑制细菌生长与繁殖的抗菌物质。其毒性的大小,常随性别、发育阶段和季节的不同而有差异。一般雌蛛的毒比雄蛛大;成蛛的毒比幼蛛的毒性大;繁殖季节的雌蛛的毒性最大。