qRT-PCR检测植物miRNA的表达量,内参基因选择什么最好?可以给出特意反转录引物和qRT-PCR的引物吗?

2025-01-01 13:00:30
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回答1:

我知道和使用过的U6内参基因只有两个: RNU6-1和RNU6-2.前一个就是常见的u6,后一个有时被称为u6b. 在我的大鼠RNA样本当中,u6表达量有些太高,u6b的Cq值与我的目标miRNA比较接近,稳定性也很好。但是这些对植物样本中的内参基因选择没有什么指导意义。

为了确定u6在植物中的保守性,比较快捷的办法是找到谈论这个话题的文献综述。如果没有人写过这样的综述的话,就只能靠自己去数据库找到所有序列自己对比了。

关于内参基因的选择,必须实验确定特定样本中的表达水平稳定,其他文献中报导的内参基因不一定适合你的样本。做新的课题时,选择内参基因一般是选取3-5个常用的,PCR测试后选取。

这里有applied biosystem一篇非常好的文章讨论内参基因,里面有很多建议和备选,但都是人和小鼠中测试的。我贴链接不方便,麻烦你自己把点和斜换成标点以后使用:
www3点appliedbiosystems点com斜cms斜groups斜mcb_marketing斜documents斜generaldocuments斜cms_044972点pdf

以上公司的miR PCR是茎环法,也是我使用过的,两个引物不在同一个管内,两个步骤也是完全分开先后进行的。暂时没有看到他们有内参和目标基因在同一反应管进行的miR PCR产品, 因为他们的PCR探针都用的同一种荧光。如果楼主感兴趣RT-PCR一步反应的,并且内参能够与目标miR在同一反应体系进行的产品,还要去咨询各大厂商。