乙醇与蛋白质的沉淀和变性实验

乙醇引起的变性与沉淀

先加入蛋白液溶解，加入NaCl（盐析）降低蛋白质溶解度，形成过饱和溶液，再加入乙醇现象会更明显些。

变性的蛋白质是不会再溶于稀酸或稀碱了，应为变性即意味着结构的永久改变。你的试验中乙醇的最终浓度是95%*1ml/3ml=32%，而且最后蛋白会再溶解。因此，这个实验不足以证明蛋白质变性。

变性原因

变性作用是蛋白质受物理或化学因素的影响，改变其分子内部结构和性质的作用。一般认为蛋白质的二级结构和三级结构有了改变或遭到破坏，都是变性的结果。能使蛋白质变性的化学方法有加强酸、强碱、重金属盐、尿素、丙酮等；能使蛋白质变性的物理方法有加热(高温)、紫外线及X射线照射、超声波、剧烈振荡或搅拌等。

以上内容参考：百度百科-蛋白质变性

乙醇引起的变性与沉淀

取3支试管，编号。依顺序加入试剂：
试管一： 5%卵清蛋白溶液、95%乙醇、pH4.7缓冲溶液各1mL
试管二： 5%卵清蛋白溶液、95%乙醇、0.1mol/L的NaOH溶液各1mL
试管三： 5%卵清蛋白溶液、95%乙醇、0.1mol/L的HCl溶液各1mL

振摇混匀后，观察各管有何变化。放置片刻，向各管内加水8毫
升，然后在第2、3号管中各加一滴甲基红．再分别用0.1当量／升醋酸溶液及0.1当星／升碳酸钠溶液中和之。观察各管颜色的变化和沉淀的生成。每管再加0.1当量／升盐酸溶液数滴，观察沉淀的再溶解。解释各管发生的全部现象。

首先，只有高浓度乙醇长时间作用才会使蛋白质变性，低浓度的乙醇会使蛋白质的亲水结构（氢键）破坏而沉淀析出，类似于盐析。其次，变性的蛋白质是不会再溶于稀酸或稀碱了，应为变性即意味着结构的永久改变。你的试验中乙醇的最终浓度是95%*1ml/3ml=32%，而且最后蛋白会再溶解。因此，这个实验不足以证明蛋白质变性。
后来继续加盐酸是为了使pH值偏离等电点，增大蛋白质的溶解度，进而使蛋白质再溶解。

分离蛋白

为什么我的试管里没有沉淀生成？