可能原因是展开剂在板上跑出两条前沿线。由于展开剂的选择不对或是比例不对或不相容，造成展开剂中各组分在薄层板上的移动速度不一样，有些跑得快形成第一前沿线，有些跑得慢形成第二前沿线。第二前沿线使板分成两部分，显色时由于两部分含展开剂不同，所以显不同颜色。还有，有机酸薄层层析展开剂最好为酸性，碱性展开剂会跟乳酸反应。
